用薄层扫描法测定中药狗脊和黑狗脊中原儿茶酸及咖啡酸的含量
作者：原忠 余江天 苏世文
单位：余江天(锦州华庆制药有限公司，锦州 121000)；原忠 苏世文(沈阳药科大学中药系，沈阳 110015)
关键词：狗脊；黑狗脊；原儿茶酸；咖啡酸；含量测定
沈阳药科大学学报000510 摘 要 采用薄层扫描法测定了中药狗脊和黑狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量.结果表明，各主要产地的狗脊中原儿茶酸含量均在0.02%以上，咖啡酸的含量均在0.029%以上，其中熟狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量较高.而在黑狗脊中，咖啡酸的含量较低.
分类号 R927.2
Determination of the Contents of Protocatechuic Acid and Caffeic Acid in Rhizoma Cibotii and Rhizoma Pteris by TLCs
, 百拇医药
Yuan Zhong, Yu Jiangtian, Su Shiwen
(Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract A TLC scanning method was developed for the content determination of protocatechuic acid and caffeic acid in a commonly used Chinese medicine Rhizoma Cibotii and its related species Rhizoma Pteris. The contents of protocatechuic acid and caffeic acid in all the samples of Rhizoma Cibotii collected from various areas were above 0.020% and 0.029% respectively, and the highest content was found in the processed products of Rhizoma Cibotii. However, the contents of caffeic acid in Rhizoma Pteris were very low. This method could be used for the quality control of the Chinese medicine Rhizoma Cibotii.
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Key words Rhizoma Cibotii;Rhizoma Pteris;protocatechuic acid;caffeic acid;content determination
狗脊为蚌壳蕨科金毛狗脊Cibotium baro-metz(L.)J.Sm.的干燥根茎，主产于福建、四川、广西等地.目前，在全国范围内使用，用于肝肾不足、复受风寒湿邪所引起的腰痛脊强，足膝无力以及坐骨神经痛等症. 河南省习惯上还使用“黑狗脊”，作为狗脊的一个品种，经鉴定，来源于凤尾蕨科蜈蚣草Pteris vittata L.〔1〕
狗脊中含原儿茶酸和咖啡酸〔2〕，属水溶性酚酸类成分，具有抗炎、抗风湿的药理活性〔3～5〕.鉴于目前对于中药狗脊无含量测定方法作为质量标准，作者采用双波长薄层扫描法，同时测定了狗脊和黑狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量.结果表明，狗脊和黑狗脊中原儿茶酸的含量均高于0.020%，而且狗脊中咖啡酸的含量略高于原儿茶酸的含量，但黑狗脊中咖啡酸含量较低.此外，经炮制后的熟狗脊中酚酸类成分的含量高于生品.本方法操作简便，灵敏度高，可有效地控制狗脊的质量.
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1 仪器与试药
CS—910型薄层扫描仪(日本岛津)；硅胶H(薄层层析用，青岛海洋化工厂)；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所)；咖啡酸对照品(自制，经熔点、红外光谱、氢谱测定，并与文献所报道的数据对照鉴定).
样品于1995年购自当地药材公司，均进行了药材及原植物学名鉴定(见表1).
2 方法与结果
2.1 薄层色谱条件
薄层层析板：硅胶H板(20 cm×20 cm)，105℃活化2 h;展开剂：氯仿-甲醇-甲酸(体积比9∶1∶0.5).
2.2 薄层扫描条件
测定波长：λS=295 nm，λR=390 nm；狭缝：1.25 mm×1.25 mm；扫描方式：反射式锯齿扫描；线性参数SX=3.
, 百拇医药
2.3 标准曲线的制备
分别精密称取原儿茶酸和咖啡酸对照品适量，以甲醇为溶媒分别制成0.204 mg/mL的原儿茶酸标准溶液和0.228 mg/mL咖啡酸标准溶液.分别吸取原儿茶酸标准溶液和咖啡酸标准溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL点于硅胶H薄层板上，展至16 cm，取出晾干.首先对咖啡酸斑点(Rf 0.43)进行扫描测定.1～2 h内对原儿茶酸斑点(Rf 0.38)进行扫描测定.原儿茶酸的量在0.408～2.448 μg的范围内，与其峰面积积分值成线性关系，回归方程Y=5.63X-1.30,相关系数r=0.999 0.咖啡酸的量在0.456～2.736 μg的范围内，与其峰面积积分值成线性关系，回归方程Y=4.02X-3.61,相关系数r=0.999 3.
2.4 回收率试验
分别将一定量的原儿茶酸对照品和咖啡酸对照品加入样品中，按“样品测定”方法测定，计算出原儿茶酸的平均回收率为96.2%，相对标准偏差RSD为4.7%(n=5)，咖啡酸的平均回收率为95.4%，相对标准偏差RSD为5.1%(n=5).
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2.5 样品测定
分别取干燥的样品粉末(60目)1.0 g，加水50 mL，浸泡过夜后热提1.5 h，静置滤过，滤液用10%盐酸调pH值至2，酸化液用乙醚萃取(20 mL×3次)，合并萃取液，回收乙醚，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，用甲醇定容，作为供试液.采用外标两点法，按前述条件进行含量测定，结果见表1.
Tab.1 The contents of protocatechuic acid and caffeic acid in Rhizoma cibotii and Rhizoma pteris Sample
Original plant
Place of
collection
, 百拇医药
Average contents/%(RSD/%,n=4)
Protocatechuic acid
Caffeic acid
Rhizoma Cibotii
Cibotium barometz
Fujian
0.022 9(1.95)
0.028 8(2.20)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
, 百拇医药
Guangdong
0.046 0(1.74)
0.050 9(1.91)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
Guangxi
0.021 3(0.96)
0.029 1(1.08)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
Sichuan
, 百拇医药
0.023 3(2.14)
0.029 6(3.69)
Processed product of Rhizoma Cibotii
C.barometz
Fujian
0.057 8(1.06)
0.066 3(1.83)
Rhizoma Pteris
Pteris vittata
Henan
0.024 8(2.67)
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0.010 2(5.13)
3 讨论
3.1 提取方法的考察
样品分别以95%乙醇和甲醇为溶剂，采用超声波振荡或索氏提取器提取，进行测定，由于狗脊中酚性成分较多，对薄层层析结果有一定的干扰.改用水热提后，易将水溶性的原儿茶酸和咖啡酸提取完全，且与水不溶性杂质分离.水提液经盐酸酸化后，原儿茶酸和咖啡酸均以游离型存在，易被乙醚萃取，同时可防止一些水溶性成分的干扰.结果表明，样品的薄层色谱图上，待测物斑点清晰，无杂质干扰.
3.2 稳定性考察
可见光下，原儿茶酸和咖啡酸的斑点显淡黄色.但随着放置时间的延长，原儿茶酸的斑点颜色加深.因此，待展开剂挥散后, 对原儿茶酸色斑(斑点量2.448 μg) 每隔20 min扫描一次.结果表明，在2 h内，随着时间延长，积分值逐渐下降，因开始1 h内积分值下降较快，故测定宜在展开剂挥散1 h后进行，同时为了保证较高的灵敏度，确定测定时间为：展开剂挥散1 h后，2 h以内.
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3.3 狗脊和黑狗脊的比较
根据《新修本草》和《图经本草》所述，历代本草多以至今少数地区使用的“黑狗脊”作为狗脊的主流品种.而金毛狗脊作为狗脊的使用情况，在本草中记载较晚.可见，古代一直以黑狗脊作为狗脊药用.从药材性状上看，两者的差别明显.但关于两种药材的化学成分，报道较少.仅从薄层层析结果来看，两者无明显区别.作者通过薄层扫描测定发现，尽管狗脊和黑狗脊中均含有原儿茶酸和咖啡酸，但狗脊中咖啡酸的含量略高于原儿茶酸的含量，而黑狗脊中咖啡酸的含量明显低于原儿茶酸的含量.因此，原儿茶酸和咖啡酸的含量测定可作为狗脊和黑狗脊质量控制的参考依据.
参考文献
1，河南省卫生厅.河南省中药材标准:第一册.郑州:中原农民出版社,1991.87
2，原忠,苏世文.中药狗脊化学成分的研究.中草药,1996,27(2):76～77
, 百拇医药
3，Catalan J. An investigation of the possible relation between electronic structure and antirheumatic activity in the hydroxy-benzoic acids. Experientia, 1976,23(Suppl):177～181
4，Mehler E L. Quantum chemical analysis of stucture activity relationships in nonsteroidals antiinflammatory drugs. Mol pharmacol，1982,22:525～531
5，Kiso Yoshinobu. Antihepatotoxic principles of Curcuma longa rhizomes. Planta Med,1983,49:185
收稿日期:2000-03-23
, 百拇医药
单位：余江天(锦州华庆制药有限公司，锦州 121000)；原忠 苏世文(沈阳药科大学中药系，沈阳 110015)
关键词：狗脊；黑狗脊；原儿茶酸；咖啡酸；含量测定
沈阳药科大学学报000510 摘 要 采用薄层扫描法测定了中药狗脊和黑狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量.结果表明，各主要产地的狗脊中原儿茶酸含量均在0.02%以上，咖啡酸的含量均在0.029%以上，其中熟狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量较高.而在黑狗脊中，咖啡酸的含量较低.
分类号 R927.2
Determination of the Contents of Protocatechuic Acid and Caffeic Acid in Rhizoma Cibotii and Rhizoma Pteris by TLCs
, 百拇医药
Yuan Zhong, Yu Jiangtian, Su Shiwen
(Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract A TLC scanning method was developed for the content determination of protocatechuic acid and caffeic acid in a commonly used Chinese medicine Rhizoma Cibotii and its related species Rhizoma Pteris. The contents of protocatechuic acid and caffeic acid in all the samples of Rhizoma Cibotii collected from various areas were above 0.020% and 0.029% respectively, and the highest content was found in the processed products of Rhizoma Cibotii. However, the contents of caffeic acid in Rhizoma Pteris were very low. This method could be used for the quality control of the Chinese medicine Rhizoma Cibotii.
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Key words Rhizoma Cibotii;Rhizoma Pteris;protocatechuic acid;caffeic acid;content determination
狗脊为蚌壳蕨科金毛狗脊Cibotium baro-metz(L.)J.Sm.的干燥根茎，主产于福建、四川、广西等地.目前，在全国范围内使用，用于肝肾不足、复受风寒湿邪所引起的腰痛脊强，足膝无力以及坐骨神经痛等症. 河南省习惯上还使用“黑狗脊”，作为狗脊的一个品种，经鉴定，来源于凤尾蕨科蜈蚣草Pteris vittata L.〔1〕
狗脊中含原儿茶酸和咖啡酸〔2〕，属水溶性酚酸类成分，具有抗炎、抗风湿的药理活性〔3～5〕.鉴于目前对于中药狗脊无含量测定方法作为质量标准，作者采用双波长薄层扫描法，同时测定了狗脊和黑狗脊中原儿茶酸和咖啡酸的含量.结果表明，狗脊和黑狗脊中原儿茶酸的含量均高于0.020%，而且狗脊中咖啡酸的含量略高于原儿茶酸的含量，但黑狗脊中咖啡酸含量较低.此外，经炮制后的熟狗脊中酚酸类成分的含量高于生品.本方法操作简便，灵敏度高，可有效地控制狗脊的质量.
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1 仪器与试药
CS—910型薄层扫描仪(日本岛津)；硅胶H(薄层层析用，青岛海洋化工厂)；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所)；咖啡酸对照品(自制，经熔点、红外光谱、氢谱测定，并与文献所报道的数据对照鉴定).
样品于1995年购自当地药材公司，均进行了药材及原植物学名鉴定(见表1).
2 方法与结果
2.1 薄层色谱条件
薄层层析板：硅胶H板(20 cm×20 cm)，105℃活化2 h;展开剂：氯仿-甲醇-甲酸(体积比9∶1∶0.5).
2.2 薄层扫描条件
测定波长：λS=295 nm，λR=390 nm；狭缝：1.25 mm×1.25 mm；扫描方式：反射式锯齿扫描；线性参数SX=3.
, 百拇医药
2.3 标准曲线的制备
分别精密称取原儿茶酸和咖啡酸对照品适量，以甲醇为溶媒分别制成0.204 mg/mL的原儿茶酸标准溶液和0.228 mg/mL咖啡酸标准溶液.分别吸取原儿茶酸标准溶液和咖啡酸标准溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL点于硅胶H薄层板上，展至16 cm，取出晾干.首先对咖啡酸斑点(Rf 0.43)进行扫描测定.1～2 h内对原儿茶酸斑点(Rf 0.38)进行扫描测定.原儿茶酸的量在0.408～2.448 μg的范围内，与其峰面积积分值成线性关系，回归方程Y=5.63X-1.30,相关系数r=0.999 0.咖啡酸的量在0.456～2.736 μg的范围内，与其峰面积积分值成线性关系，回归方程Y=4.02X-3.61,相关系数r=0.999 3.
2.4 回收率试验
分别将一定量的原儿茶酸对照品和咖啡酸对照品加入样品中，按“样品测定”方法测定，计算出原儿茶酸的平均回收率为96.2%，相对标准偏差RSD为4.7%(n=5)，咖啡酸的平均回收率为95.4%，相对标准偏差RSD为5.1%(n=5).
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2.5 样品测定
分别取干燥的样品粉末(60目)1.0 g，加水50 mL，浸泡过夜后热提1.5 h，静置滤过，滤液用10%盐酸调pH值至2，酸化液用乙醚萃取(20 mL×3次)，合并萃取液，回收乙醚，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，用甲醇定容，作为供试液.采用外标两点法，按前述条件进行含量测定，结果见表1.
Tab.1 The contents of protocatechuic acid and caffeic acid in Rhizoma cibotii and Rhizoma pteris Sample
Original plant
Place of
collection
, 百拇医药
Average contents/%(RSD/%,n=4)
Protocatechuic acid
Caffeic acid
Rhizoma Cibotii
Cibotium barometz
Fujian
0.022 9(1.95)
0.028 8(2.20)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
, 百拇医药
Guangdong
0.046 0(1.74)
0.050 9(1.91)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
Guangxi
0.021 3(0.96)
0.029 1(1.08)
Rhizoma Cibotii
C.barometz
Sichuan
, 百拇医药
0.023 3(2.14)
0.029 6(3.69)
Processed product of Rhizoma Cibotii
C.barometz
Fujian
0.057 8(1.06)
0.066 3(1.83)
Rhizoma Pteris
Pteris vittata
Henan
0.024 8(2.67)
, http://www.100md.com
0.010 2(5.13)
3 讨论
3.1 提取方法的考察
样品分别以95%乙醇和甲醇为溶剂，采用超声波振荡或索氏提取器提取，进行测定，由于狗脊中酚性成分较多，对薄层层析结果有一定的干扰.改用水热提后，易将水溶性的原儿茶酸和咖啡酸提取完全，且与水不溶性杂质分离.水提液经盐酸酸化后，原儿茶酸和咖啡酸均以游离型存在，易被乙醚萃取，同时可防止一些水溶性成分的干扰.结果表明，样品的薄层色谱图上，待测物斑点清晰，无杂质干扰.
3.2 稳定性考察
可见光下，原儿茶酸和咖啡酸的斑点显淡黄色.但随着放置时间的延长，原儿茶酸的斑点颜色加深.因此，待展开剂挥散后, 对原儿茶酸色斑(斑点量2.448 μg) 每隔20 min扫描一次.结果表明，在2 h内，随着时间延长，积分值逐渐下降，因开始1 h内积分值下降较快，故测定宜在展开剂挥散1 h后进行，同时为了保证较高的灵敏度，确定测定时间为：展开剂挥散1 h后，2 h以内.
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3.3 狗脊和黑狗脊的比较
根据《新修本草》和《图经本草》所述，历代本草多以至今少数地区使用的“黑狗脊”作为狗脊的主流品种.而金毛狗脊作为狗脊的使用情况，在本草中记载较晚.可见，古代一直以黑狗脊作为狗脊药用.从药材性状上看，两者的差别明显.但关于两种药材的化学成分，报道较少.仅从薄层层析结果来看，两者无明显区别.作者通过薄层扫描测定发现，尽管狗脊和黑狗脊中均含有原儿茶酸和咖啡酸，但狗脊中咖啡酸的含量略高于原儿茶酸的含量，而黑狗脊中咖啡酸的含量明显低于原儿茶酸的含量.因此，原儿茶酸和咖啡酸的含量测定可作为狗脊和黑狗脊质量控制的参考依据.
参考文献
1，河南省卫生厅.河南省中药材标准:第一册.郑州:中原农民出版社,1991.87
2，原忠,苏世文.中药狗脊化学成分的研究.中草药,1996,27(2):76～77
, 百拇医药
3，Catalan J. An investigation of the possible relation between electronic structure and antirheumatic activity in the hydroxy-benzoic acids. Experientia, 1976,23(Suppl):177～181
4，Mehler E L. Quantum chemical analysis of stucture activity relationships in nonsteroidals antiinflammatory drugs. Mol pharmacol，1982,22:525～531
5，Kiso Yoshinobu. Antihepatotoxic principles of Curcuma longa rhizomes. Planta Med,1983,49:185
收稿日期:2000-03-23
, 百拇医药
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